Kullanım Amacı ve Prensibi
Bushnell-Haas Agar, mikrobiolojik analizlerde kullanılan “minimal” bir besiyeridir. Bu besiyeri, bakteri gelişimi için gerekli olan temel mineralleri içermekte olup, karbon kaynağı (şeker gibi) barındırmamaktadır. Bu özellik, besiyerinin yalnızca belirli mikroorganizmaların büyümesine olanak tanıyarak, hidrokarbon metabolizması üzerine odaklanmasını sağlar.
-
Karbon Kaynağı Deneyi: Analiz edilecek hidrokarbon (örneğin, gazyağı, mineral yağ, benzin veya ham petrol), besiyerine döküldükten sonra yüzeye eklenir veya besiyerine emülsifiye edilir. Bu işlem, mikroorganizmaların hidrokarbonları enerjiye dönüştürme yeteneklerini test etmek için kritik bir adımdır.
-
Seçicilik: Bu besiyeri, yalnızca eklenen hidrokarbonu parçalayabilen ve enerjiye dönüştürebilen mikroorganizmaların üremesine izin verir. Bu özellik, belirli mikroorganizmaların izole edilmesi ve tanımlanması açısından büyük önem taşır.
- Çevresel Çalışmalar: Bushnell-Haas Agar, petrol kirliliği olan toprak veya su örneklerindeki biyoremediasyon (doğal temizleme) potansiyelini ölçmek için idealdir. Bu sayede, çevresel etki değerlendirmeleri ve temizleme stratejileri geliştirilmesine katkı sağlar.
Teknik Özellikler ve İçerik
Bushnell-Haas Agar’ın 1 litredeki tipik bileşimi, 23.0 - 25.0 g/L arasında değişmektedir. Bu bileşim, mikroorganizmaların büyümesi için gerekli olan çeşitli mineralleri içermektedir:
-
Magnesium Sulfate (MgSO₄): Enzim aktivitesi için gerekli mineral olup, mikroorganizmaların metabolizmasını destekler.
-
Calcium Chloride (CaCl₂): Hücre duvarı stabilitesi ve iyon dengesi sağlar, böylece mikroorganizmaların sağlıklı bir şekilde büyümesine olanak tanır.
- Monopotassium Phosphate (KH₂PO₄) ve Dipotassium Phosphate (K₂HPO₄): Bu bileşenler, tamponlama ve fosfor kaynağı olarak işlev görür, pH dengesinin korunmasına yardımcı olur.
- Ammonium Nitrate (NH₄NO₃): Temel azot kaynağı olarak, mikroorganizmaların büyümesi için gerekli olan azotu sağlar.
- Ferric Chloride (FeCl₃): Mikro besin ve eser element olarak, mikroorganizmaların gelişiminde kritik bir rol oynar.
- Agar: Katılaştırıcı ajan olarak kullanılır ve besiyerinin fiziksel yapısını oluşturur.
- pH Değeri: 25°C’de pH değeri $7.0 \pm 0.2$ düzeyindedir, bu da mikroorganizmaların büyümesi için uygun bir ortam sağlar.
Hazırlama Talimatı
Bushnell-Haas Agar’ın hazırlanması, dikkatli bir şekilde gerçekleştirilmelidir:
-
Tartım: 1 litre distile su içerisine yaklaşık 25.0 gram toz besiyeri eklenir.
-
Çözme: Karışım, tamamen çözünene kadar karıştırılarak ısıtılır ve 1 dakika kaynatılır.
- Sterilizasyon: Karışım, 121°C’de 15 dakika boyunca otoklavda sterilize edilir.
- Hidrokarbon İlavesi: Sterilizasyon sonrası, analiz edilecek olan steril hidrokarbon kaynağı aseptik olarak besiyerine eklenebilir veya plaklara ekim yapıldıktan sonra yüzeye bir tabaka halinde yayılabilir.
Uygulama ve Değerlendirme
Bushnell-Haas Agar ile yapılan uygulamalar, mikroorganizmaların hidrokarbon metabolizmasını incelemek için kritik öneme sahiptir:
- İnkübasyon: Örnekler genellikle 25-30°C’de 7 ila 14 gün (bazen 3 haftaya kadar) boyunca inkübe edilir. Hidrokarbon metabolizması yavaş bir süreç olduğundan, uzun süreli takip gereklidir.
- Üreme: Plak yüzeyinde görülen koloniler, eklenen petrol türevi karbon kaynağını başarıyla metabolize eden “hidrokarbonoklastik” bakterileri veya mantarları temsil eder. Bu, çevresel biyoremediasyon çalışmalarında önemli bir gösterge olarak değerlendirilir.
Bushnell-Haas Agar, çevresel mikrobioloji alanında önemli bir araç olup, petrol kirliliği ile mücadelede ve biyoremediasyon potansiyelinin değerlendirilmesinde kritik bir rol oynamaktadır.
